ООО «Гамета-Агро»ООО «Гамета-Агро». Инструменты и оборудование для АПК

Методические рекомендации по криоконсервации семени в пропиленовые соломинки объемом 0,25 мл.

Методические рекомендации по криоконсервации семени в пропиленовые соломинки объемом 0,25 мл.

1. Перед взятием семени на спермоприемниках шариковой ручкой по трафарету отмечают линию будущей сварки и отреза. Сперму получают традиционным способом на вагину с одноразовым полиэтиленовым спермоприемником.

2. После взятия спермы спермоприемник запаивают ручным термосваривающим аппаратом типа «Молния» по линии, отмеченной трафаретом, и передают в комнату первичной обработки семени (рекомендуемое оборудование - термосварочный аппарат FR-300).



3. Лаборант получает спермоприемник со спермой, отрезает ножницами его угол и берет ниже описанными способам необходимое количество семени для определения подвижности и концентрации. Спермоприемник с семенем, помещают в пластмассовый стакан (д.60) и ставят в термостат ТС-1/20 при температуре 27 0С.




¨ Определение подвижности семени.


Технолог из спермоприемника мерной пипеткой берет каплю семени. Капля семени наносится на предметное стекло и смешивается с каплей 2,9% цитрата натрия. Полученная суспензия накрывается покровным стеклом, ставится на обогревательный столик (Морозова или Пакенаса) и под микроскопом при увеличении 1х100, или 1х200 определяется подвижность в баллах согласно утвержденной методики (рекомендуемое оборудование: микроскоп Микмед-2 вар. 2).





 Определение концентрации семени.

Лаборант из спермоприемника автоматическим микродозатором берет каплю семени 100 мкл. (рекомендуемое оборудование - автоматический микродозатор с фиксированным объемом 100 мкл.). Для этого на конец микродозатора надевается наконечник желтого цвета, и кончик наконечника помещается в сперму. Нажимая на толкатель дозатора, набирает необходимую дозу спермы и вводит ее во флакон с заранее внесенной дозой цитрата натрия. Перед началом взятия в приготовленные флаконы (количество которых определяют по числу эякулятов, которые должны быть получены в этот день) при помощи бутылочного дозатора (рекомендуемое оборудование – настольный бутылочный дозатор переменного объема 2,5-25 мл.) вносят по 10 мл. 3,5% раствора цитрата натрия. Для этого лаборант надевает сменный наконечник на конец дозатора, устанавливает на дозаторе количество объема раствора, необходимого для введения во флакон, приводной шланг помещает в сосуд с раствором, и путем нажатия на толкатель дозатора вводит этот раствор во флакон.




Полученную суспензию (сперму с раствором цитрата натрия) из флакона вносят в кювету и на фотоэлектрокалориметре определяют оптическую плотность, согласно которой вычисляют концентрацию спермиев в 1 мл полученного эякулята (рекомендуемое оборудование - спектрофотометр PV1251C с RS-232 с программным обеспечением).







¨ Взвешивание семени


На весы (рекомендуемое оборудование – весы ЕТ-600 ЕР или Н 2 класса точности) ставится пластмассовый стакан, в него помещается спермоприемник отрезанный по трафарету. Весы выводятся на отметку «0» цифрового табло, удаляется спермоприемник и вносится в освободившийся стакан семяприемник с семенем. По цифре на электронном табло определяется вес семени. Масса семени 1г соответствует 1 мл.

4. Сперму, пригодную для замораживания, достают из термостата и осуществляют дальнейшее ее разбавление. Разбавление производится в несколько этапов.






¨ Первичное разбавление


Лаборант разбавляют сперму в спермоприемнике в соотношении 1:1 ЛГЖ - средой, имеющей температуру 27 0С. Для этого используется описанный ранее бутылочный дозатор с переменным объемом 5-25 мл. На дозаторе устанавливается данные о необходимом объеме среды, приводной шланг дозатора вносится в колбу со средой, находящуюся на магнитной мешалке с подогревом (рекомендуемое оборудование – магнитная мешалка с подогревом RST basic), выводящий шланг вносится в спермоприемник с семенем, вложенный в стеклянный или полиэтиленовый стакан д. 60, и путем нажатия на толкатель дозатора вводится необходимый объем среды в спермоприемник. После разбавления семя в спермоприемнике оставляют при комнатной температуре (на 15-20 минут) до достижения 20-22 0С.

¨ Вторичное разбавление


Через 15-20 минут после первого разбавления спермы проводится вторичное разбавление. В соответствии с таблицей разбавления определяется коэффициент и с помощью перистатического насоса с цифровым контролем (рекомендуемое оборудование – РD5206) вводится среда при температуре 18-20 0С. Для этого на табло насоса набирается величина объема необходимой для разбавления среды (объем эякулята умноженный на коэффициент разбавления) и путем нажатия на кнопку «вкл», вводится среда в спермоприемник.

¨ Смешивание эякулятов

После получения и двукратного разбавления второго (третьего) эякулята все полученные эякуляты сливают в один спермоприемник и смешивают.

Приготовление ЛГЖ-среды и разбавление семени.

Для приготовления среды используют бидистиллированную воду (рекомендуемое оборудование - бидистиллятор стеклянный БС). В сухую термостойкую колбу вносят простерилизованный магнит, порошок лактозы (фармакопейной) и приливают прокипяченную бидистиллированную воду с температурой 70-80 0С. Колбу ставят на магнитную мешалку, при перемешивании раствора температуру его доводят до 300С и добавляют санирующий препарат, затем глицерин и желток.

Приготовленную среду делят на две части (20% и 80%). Одну часть среды (20%) ставят на магнитную мешалку с подогревом при температуре 27 0С, вторую (80%) оставляют при комнатной температуре.

5. Фасовка и маркировка семени.


Спермоприемник с разбавленным семенем закрепляется на штанге фасовочной машины комплекса и осуществляется фасовка и маркировка семени в полипропиленовых соломинках объемом 0,25 мл. (рекомендуемое оборудование – автоматизированный комплекс фасовки и маркировки семени быков-производителей в полипропиленовые соломинки объемом 0,25 мл.) в соответствии с инструкцией по эксплуатации комплекса.

6. Подготовка к эквилибрации

Зафасованное в соломинки семя раскладывается на счетную рейку, установленную под рамкой, и заживается в рамке держателя. Рамки соломинками устанавливаются в холодильник на 3-4 часа для эквилибрации при температуре 4 0С.

7. Заморозка семени

Замораживают семя на замораживающем устройстве установленном в ХБ-0,5 согласно существующей методики.

8. Хранение

Замороженное в соломинках семя раскладывается в стаканы (в стакан диаметром 60 мм мах помещается 400 штук, в стакан диаметром 40 мм – 160 штук). Стаканы вставляется в канистры по 4-5 стаканов. Канистры устанавливаются в хранилища ХБ-0,5 ил ХБ-0,2.

Расчет расходных материалов для криоконсервации в полипропиленовых соломинках объемом 0,25 мл. дневной дозы быка-производителя



Объем полученного семени после разбавления  всех эякулятов в день мл 70
Количество доз доз 350
Необходимое количество соломинок шт 355
Необходимое количество шариков шт 700
Необходимое количество втулок резиновых шт 2
Необходимое количество трубки ПВХ м/п 0,33


Для раскладки необходимо 3-4 счетных рейки (по 120 штук на 1 рейку).

На каждого взятого в день быка, сперму которого криоконсервируют в соломинки, необходимо 3-4 рамки (по 120 штук на 1 рамку).


Необходимое количество материалов на 1 быка в среднем на 1 тысячу доз в соломинках


Необходимое количество соломинок шт 1015
Необходимое количество шариков шт 2030
Необходимое количество втулок резиновых шт 6
Необходимое количество трубки ПВХ м/п 1



Необходимое количество материалов на 1 быка в год при ежегодном накоплении в 25 тысяч доз


Необходимое количество соломинок шт 25375
Необходимое количество шариков шт 50750
Необходимое количество втулок резиновых шт 150
Необходимое количество трубки ПВХ м/п 25
Стакан д. 60 (или стакан д. 40) шт 70 (160)
Канистр шт 18

 

Другие статьи:
142143, РФ, Московская обл., Подольский р-н, п. Быково, 49 Тел.: (4967) 676-797 код из Москвы 27; (+7 916) 803-49-51 E-mail: gameta@gameta.ru
Rambler's Top100